細胞名稱：COLO320/DM人結腸癌細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)前的工作準備充分

包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。

玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。

試劑配置。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

無菌檢驗。主要采用過濾除菌：如抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉等。有些可以采用高壓滅菌，如 PBS、D-Hank's等。

試劑分裝保存

包括營養(yǎng)液、血清等。

血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青m素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細胞培養(yǎng)）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。

熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 后計時，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清（包括不同批次）對細胞的影響。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS1133P小鼠骨髓來源巨噬原代細胞

YS1134P小鼠皮層神經(jīng)元原代細胞

YS1135P小鼠嗅球神經(jīng)元原代細胞

YS1136P小鼠椎間盤髓核原代細胞

YS1137P小鼠胸腺上皮原代細胞

YS1138P小鼠骨髓樹突狀原代細胞(DC原代細胞)

YS1139P小鼠肺泡巨噬原代細胞

YS1140P小鼠脾淋巴原代細胞

YS1141P小鼠角膜基質(zhì)原代細胞

YS1142P小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)原代細胞

YS1143P小鼠支氣管平滑肌原代細胞

YS1144P小鼠結腸黏膜上皮原代細胞

YS1145P小鼠脊髓成纖維原代細胞

YS1146P小鼠背根神經(jīng)元原代細胞

YS1147P小鼠表皮成纖維原代細胞

YS1148P小鼠表皮角化原代細胞

YS1149P小鼠腹膜間皮原代細胞

YS1150P小鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干原代細胞

YS1151P小鼠海綿體內(nèi)皮原代細胞

YS1152P小鼠骺軟骨原代細胞

YS1153P小鼠呼吸道上皮原代細胞

YS1154P小鼠肌腱干原代細胞

YS1155P小鼠肌源性干原代細胞

YS1156P小鼠脊髓神經(jīng)元原代細胞

YS1157P小鼠角膜內(nèi)皮原代細胞

YS1158P小鼠淋巴結淋巴原代細胞

YS1159P小鼠胚肺成纖維原代細胞

YS1160P小鼠前列腺成纖維原代細胞

YS1161P小鼠乳腺成纖維原代細胞

YS1162P小鼠視乳頭星形膠質(zhì)原代細胞

YS1163P小鼠微血管周原代細胞

YS1164P小鼠胸腺淋巴原代細胞

YS1165P小鼠牙齦上皮原代細胞

YS1166P小鼠牙周膜成纖維原代細胞

YS1167P小鼠真皮微血管內(nèi)皮原代細胞

YS1168P小鼠脂肪干原代細胞

YS1169P小鼠椎間盤纖維環(huán)原代細胞

YS1170P小鼠卵泡膜原代細胞

YS1171P小鼠骨骼肌衛(wèi)星原代細胞

YS1172P小鼠多巴胺神經(jīng)元原代細胞

YS1173P小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)原代細胞

YS1174P小鼠腎小球上皮原代細胞

YS1175P小鼠全骨髓原代細胞

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